【检测原理】
DRG公司的PAPP-A酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验（ELISA）。反应板上的微孔包被有多克隆的抗PAPP-A抗体。含有内源性PAPP-A的病人样本在包被孔中与试验缓冲液进行孵育。孵育后，用洗涤液洗去未结合的物质，在第二个孵育步骤中，加入过氧化物酶标记的抗PAPP-A抗体，形成“三明治”复合物。加入底物溶液后，发生颜色反应，颜色强度与病人样品中PAPP-A的浓度成正比。
【试剂盒成分】
1） 微孔板
12×8孔（可拆），96孔，微孔中包被了抗PAPP-A抗体（多克隆抗体）。
2） 标准品（0-5）
6支（冻干粉），0.15ml，浓度：0；1；2.5；5.0；15；30μg/ml，转换系数：1mU/mL=4.5mg/L，含0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
3） 质控（高与低）
2瓶（冻干粉），0.15ml，质控值及具体参考范围见QC质控单；含0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
4） 分析缓冲液
1瓶，25ml，即用型，含0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
5） 酶联物
1支，1.5ml，11倍浓缩，内含辣根过氧酶标记的复合物。 含0.03%的Proclin，0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
6） 酶联物稀释液
1支，14ml，即用型，含0.03%的Proclin，0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
7） 底物液 四甲基联苯胺（TMB），1支，14ml，即用型。
8） 终止液 0.5M的H2SO4，1支，14ml，即用型；请不要接触终止液，以免着刺激或着烧皮肤。
9） 洗涤液 1支，30ml（40倍浓缩）。见“试剂准备”
注意：根据需要可额外订购零标准品用于稀释样本
实验所需器材（但试剂盒不提供）
1) 酶标仪（450±10nm）（例如：DRG公司的微孔板读数仪）
2) 标准移液器。
3) 吸水纸
4) 蒸馏水或去离子水
5) 计时器
6) 半对数坐标纸或数据处理软件
【储存与稳定性】
未开启的试剂在2-8℃下贮存，在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂。开封的试剂必须储存于2-8℃的环境下。包被板也必须储存于2-8℃的环境下。一旦打开包装袋，必须将它小心的密封起来。开封的试剂盒如果储存在上面所述的环境中，其免疫活性在两个月内稳定。
【样本采集与准备】
此检测试剂盒将用到血清或血浆（EDTA-，肝素-或柠檬酸血浆），请不要使用溶血，黄疸血或脂血样品；含有跌氮化物的样本也不能使用。
样品采集
血清：
静脉穿刺采集全血，待其凝血，在室温下离心分离血清。未完全凝血前请勿离心，接受了抗凝剂治疗的病人样品可能需要更长的凝血时间。
血浆：
将全血采集到含有抗凝剂的离心管，采集后立即离心分离。
样品的储存
实验开始前应用盖子将样品密封好，2-8℃下可存放5天。
如果EDTA-血浆储存于2-8℃的环境下，必须在48小时内将其检测掉。如果将样品冻存于-20℃的环境下则可将其存放更长时间（长达2个月），只可冻存一次。解冻的样本在实验之前必须要上下倒置几次。
样品的稀释
初次检测中，若出现样本浓度高于最高标准品浓度的则需用零标准品进一步稀释，最后检测结果乘以相关的稀释因子。
例子：
a）按1：10稀释： 10μL的血清+90μL的零标准品（充分混合）
b）按1：100稀释： 10ul的稀释a)+90ul的零标准品（充分混合）
【检测方法】
实验开始前必须将所有的试剂和所需数目的板条都平衡至室温。
标准品
在含冻干成分的标准品瓶内加入150μl蒸馏水。
注意：配制的标准品可在2-8℃下储存2个月。
质控品
在每一冻干质控品的试剂瓶中加入150μl蒸馏水，使用前多摇晃几次，将其混匀。
注意：配制的质控品可在2-8℃下储存2个月。
洗涤液
用1170ml去离子水将30ml浓缩洗涤液稀释到1200ml。稀释好的洗涤液可在室温下稳定存放2周。
酶联物
实验开始前30分钟内，用10ml酶联物稀释液稀释1.0ml浓缩的酶联物。
注意：酶联物必须实验开始前30分钟内临时配置，并且储存时间不能超过24小时。如果包被板分好几次做，则每次实验只需配置所需要的量即可。
【检测步骤】
所有的标准品、质控品和样品都必须做双份检测以确保所有的检测条件都一样。
每一次实验都应建立一标准曲线。
1）将所需数目的板条置于板架上。
2）用一次性吸嘴将标准品﹑质控品和样品分别10μL加入相应的检测孔中。
3）每孔加入100μL的分析缓冲液，充分混合10秒，完全混合这一步非常重要。
4）室温下温育30分钟。
5）快速弃去检测孔中的内含物，每孔用400μL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干以除去残余液体。特别注意：洗板步骤是否正确操作会明显影响实验的灵敏度和精确度。
6）每孔加入100μL已稀释好的酶联物（见“试剂准备”）。
7）在室温下温育30分钟。
9）快速弃去检测孔中的内含物，每孔用300μL的洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干以除去残余液体。
10）每孔加入100μL底物液。
11）在室温下温育15分钟。
12）每孔加入50μL终止液以终止酶反应。
13）在加终止液后10分钟内于450±10nm处读取OD值。
【结果计算】
1) 计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。
2) 用吸光度值作为纵坐标（y），浓度值作为横坐标（x），以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值进行标绘，作一标准曲线。
3) 用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。
4) 自动计算方法：在IFU上，它用四参数曲线已自动计算出结果。其它的归纳方法可能会得出稍微不同的结果。
5) 样品的浓度可直接从标准曲线上读取。样品中PAPP-A浓度高于最高标准品的必须用进行进一步的稀释。在计算样品浓度时就应当把此稀释因子考虑进去。
