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妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒

妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒
PAPP-A ELISA

产品规格:96T
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产品特点

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1,样本类型:血清和血浆(EDTA-,肝素-或柠檬酸血浆)
2,原理:夹心法原理
3,标记物:辣根过氧酶标记
4,读数波长:450±10nm处读取OD值
5,储存条件:2-8℃的环境下

【检测原理】
DRG公司的PAPP-A酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验(ELISA)。反应板上的微孔包被有多克隆的抗PAPP-A抗体。含有内源性PAPP-A的病人样本在包被孔中与试验缓冲液进行孵育。孵育后,用洗涤液洗去未结合的物质,在第二个孵育步骤中,加入过氧化物酶标记的抗PAPP-A抗体,形成“三明治”复合物。加入底物溶液后,发生颜色反应,颜色强度与病人样品中PAPP-A的浓度成正比。

应用范围

妊娠概念图
【检测原理】
DRG公司的PAPP-A酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验(ELISA)。反应板上的微孔包被有多克隆的抗PAPP-A抗体。含有内源性PAPP-A的病人样本在包被孔中与试验缓冲液进行孵育。孵育后,用洗涤液洗去未结合的物质,在第二个孵育步骤中,加入过氧化物酶标记的抗PAPP-A抗体,形成“三明治”复合物。加入底物溶液后,发生颜色反应,颜色强度与病人样品中PAPP-A的浓度成正比。
 
【试剂盒成分】
1) 微孔板
12×8孔(可拆),96孔,微孔中包被了抗PAPP-A抗体(多克隆抗体)。
2) 标准品(0-5)
6支(冻干粉),0.15ml,浓度:0;1;2.5;5.0;15;30μg/ml,转换系数:1mU/mL=4.5mg/L,含0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
3) 质控(高与低)
2瓶(冻干粉),0.15ml,质控值及具体参考范围见QC质控单;含0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
4) 分析缓冲液
1瓶,25ml,即用型,含0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
5) 酶联物
1支,1.5ml,11倍浓缩,内含辣根过氧酶标记的复合物。 含0.03%的Proclin,0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
6) 酶联物稀释液
1支,14ml,即用型,含0.03%的Proclin,0.015% BND和0.010% MIT作为防腐剂。
7) 底物液    四甲基联苯胺(TMB),1支,14ml,即用型。
8) 终止液    0.5M的H2SO4,1支,14ml,即用型;请不要接触终止液,以免着刺激或着烧皮肤。
9) 洗涤液    1支,30ml(40倍浓缩)。见“试剂准备”
注意:根据需要可额外订购零标准品用于稀释样本
实验所需器材(但试剂盒不提供)
1)  酶标仪(450±10nm)(例如:DRG公司的微孔板读数仪)
2)  标准移液器。
3)  吸水纸
4)  蒸馏水或去离子水
5)  计时器
6)  半对数坐标纸或数据处理软件
 
【储存与稳定性】
未开启的试剂在2-8℃下贮存,在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂。开封的试剂必须储存于2-8℃的环境下。包被板也必须储存于2-8℃的环境下。一旦打开包装袋,必须将它小心的密封起来。开封的试剂盒如果储存在上面所述的环境中,其免疫活性在两个月内稳定。
 
【样本采集与准备】
此检测试剂盒将用到血清或血浆(EDTA-,肝素-或柠檬酸血浆),请不要使用溶血,黄疸血或脂血样品;含有跌氮化物的样本也不能使用。
样品采集
血清:
静脉穿刺采集全血,待其凝血,在室温下离心分离血清。未完全凝血前请勿离心,接受了抗凝剂治疗的病人样品可能需要更长的凝血时间。
血浆:
将全血采集到含有抗凝剂的离心管,采集后立即离心分离。
 
样品的储存
实验开始前应用盖子将样品密封好,2-8℃下可存放5天。
如果EDTA-血浆储存于2-8℃的环境下,必须在48小时内将其检测掉。如果将样品冻存于-20℃的环境下则可将其存放更长时间(长达2个月),只可冻存一次。解冻的样本在实验之前必须要上下倒置几次。
 
样品的稀释
初次检测中,若出现样本浓度高于最高标准品浓度的则需用零标准品进一步稀释,最后检测结果乘以相关的稀释因子。
例子:
a)按1:10稀释: 10μL的血清+90μL的零标准品(充分混合)
b)按1:100稀释: 10ul的稀释a)+90ul的零标准品(充分混合)
 
【检测方法】
实验开始前必须将所有的试剂和所需数目的板条都平衡至室温。
标准品
在含冻干成分的标准品瓶内加入150μl蒸馏水。
注意:配制的标准品可在2-8℃下储存2个月。
质控品
在每一冻干质控品的试剂瓶中加入150μl蒸馏水,使用前多摇晃几次,将其混匀。
注意:配制的质控品可在2-8℃下储存2个月。
洗涤液
用1170ml去离子水将30ml浓缩洗涤液稀释到1200ml。稀释好的洗涤液可在室温下稳定存放2周。
酶联物
实验开始前30分钟内,用10ml酶联物稀释液稀释1.0ml浓缩的酶联物。
注意:酶联物必须实验开始前30分钟内临时配置,并且储存时间不能超过24小时。如果包被板分好几次做,则每次实验只需配置所需要的量即可。
 
【检测步骤】
所有的标准品、质控品和样品都必须做双份检测以确保所有的检测条件都一样。
每一次实验都应建立一标准曲线。
1)将所需数目的板条置于板架上。
2)用一次性吸嘴将标准品﹑质控品和样品分别10μL加入相应的检测孔中。
3)每孔加入100μL的分析缓冲液,充分混合10秒,完全混合这一步非常重要。
4)室温下温育30分钟。
5)快速弃去检测孔中的内含物,每孔用400μL洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干以除去残余液体。特别注意:洗板步骤是否正确操作会明显影响实验的灵敏度和精确度。
6)每孔加入100μL已稀释好的酶联物(见“试剂准备”)。
7)在室温下温育30分钟。
9)快速弃去检测孔中的内含物,每孔用300μL的洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干以除去残余液体。
10)每孔加入100μL底物液。
11)在室温下温育15分钟。
12)每孔加入50μL终止液以终止酶反应。
13)在加终止液后10分钟内于450±10nm处读取OD值。
 
【结果计算】
1) 计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。
2) 用吸光度值作为纵坐标(y),浓度值作为横坐标(x),以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值进行标绘,作一标准曲线。
3) 用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。
4) 自动计算方法:在IFU上,它用四参数曲线已自动计算出结果。其它的归纳方法可能会得出稍微不同的结果。
5) 样品的浓度可直接从标准曲线上读取。样品中PAPP-A浓度高于最高标准品的必须用进行进一步的稀释。在计算样品浓度时就应当把此稀释因子考虑进去。

四大优势

实验室

专业实验室

科润达生物拥有P2级实验室及GMP车间,严格按食药监械监2015-218号令医疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检查指导原则的相关要求管理。

学术态度严谨

国家注册检验师带领的实验团队,严格落实检验操作每一处细节,实验标准品定期更新,定期与外部实验室做实验数据比对等,确保实验数据的严谨。

数据客观准确

科润达生物为您配备了有着二十多年免疫专业和经验丰富的技术团队,可以为您提供客观真实的实验数据,并承诺所用的检测试剂均为优质的原装进口产品。

服务高效快捷

科润达生物以客户服务为导向,实验室管理体系与业务接口无缝对接,确保用户需求及时得到分析评价、可以为用户分析测试结果、协助用户解决技术问题。

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