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二代illumina高通量测序

二代illumina高通量测序

  应用领域:
1.科研主要应用:基因组测序、转录组测序、群体测序、扩增子测序、宏基因组测序、重测序等。
2.医学领域应用:癌症基因组、遗传病基因组、肿瘤与代谢疾病等。
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产品特点

二代illumina高通量测序仪
  illumina测序采用边合成边测序技术,在DNA片段两端加上序列已知的通用接头构建文库,文库两端的已知序列与Flowcell基底上的Oligo序列互补,每条文库片段都经过桥式PCR扩增形成一个簇,簇扩增及测序。与步骤二同时进行。即在碱基延伸过程中,每个循环反应只能延伸一个正确互补的碱基,根据四种不同的荧光信号确认碱基种类,保证最终的核酸序列质量,经过多个循环后,完整读取核酸序列。

应用范围

二代illumina高通量测序原理图
(1)DNA待测文库构建
  利用超声波把待测的DNA样本打断成小片段,目前除了组装之外和一些其他的特殊要求之外,主要是打断成200-500bp长的序列片段,并在这些小片段的两端添加上不同的接头,构建出单链DNA文库。

(2)Flowcell
  Flowcell是用于吸附流动DNA片段的槽道,当文库建好后,这些文库中的DNA在通过flowcell的时候会随机附着在flowcell表面的channel上。每个Flowcell有8个channel,每个channel的表面都附有很多接头,这些接头能和建库过程中加在DNA片段两端的接头相互配对,并能支持DNA在其表面进行桥式PCR的扩增。

(3)桥式PCR扩增与变性
  桥式PCR以Flowcell表面所固定的接头为模板,进行桥形扩增,经过不断的扩增和变性循环,最终每个DNA片段都将在各自的位置上集中成束,每一个束都含有单个DNA模板的很多分拷贝,进行这一过程的目的在于实现将碱基的信号强度放大,以达到测序所需的信号要求。

(4)测序
  测序方法采用边合成边测序的方法。向反应体系中同时添加DNA聚合酶、接头引物和带有碱基特异荧光标记的4中dNTP(如同Sanger测序法)。这些dNTP的3’-OH被化学方法所保护,因而每次只能添加一个dNTP。在dNTP被添加到合成链上后,所有未使用的游离dNTP和DNA聚合酶会被洗脱掉。接着,再加入激发荧光所需的缓冲液,用激光激发荧光信号,并有光学设备完成荧光信号的记录,最后利用计算机分析将光学信号转化为测序碱基。这样荧光信号记录完成后,再加入化学试剂淬灭荧光信号并去除dNTP 3’-OH保护基团,以便能进行下一轮的测序反应。Illumina的这种测序技术每次只添加一个dNTP的特点能够很好的地解决同聚物长度的准确测量问题,它的主要测序错误来源是碱基的替换,目前它的测序错误率在1%-1.5%之间,测序周期以人类基因组重测序为例,30x测序深度大约为1周。
  illumina测序采用边合成边测序技术,在DNA片段两端加上序列已知的通用接头构建文库,文库两端的已知序列与Flowcell基底上的Oligo序列互补,每条文库片段都经过桥式PCR扩增形成一个簇,簇扩增及测序。与步骤二同时进行。即在碱基延伸过程中,每个循环反应只能延伸一个正确互补的碱基,根据四种不同的荧光信号确认碱基种类,保证最终的核酸序列质量,经过多个循环后,完整读取核酸序列。

四大优势

专业实验室

科润达生物拥有P2级实验室及GMP车间,严格按食药监械监2015-218号令医疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检查指导原则的相关要求管理。

学术态度严谨

国家注册检验师带领的实验团队,严格落实检验操作每一处细节,实验标准品定期更新,定期与外部实验室做实验数据比对等,确保实验数据的严谨。

数据客观准确

科润达生物为您配备了有着二十多年免疫专业和经验丰富的技术团队,可以为您提供客观真实的实验数据,并承诺所用的检测试剂均为优质的原装进口产品。

服务高效快捷

科润达生物以客户服务为导向,实验室管理体系与业务接口无缝对接,确保用户需求及时得到分析评价、可以为用户分析测试结果、协助用户解决技术问题

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