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恰加斯(克氏锥虫)IgG检测试剂盒

肌肉特异性受体酪氨酸激酶自身抗体检测试剂盒(酶联免疫法)MuSK-Ab ELISA
 
【产品规格】96T
 
【预期用途】试剂盒可定性和定量检测人血清中肌肉特异性受体酪氨酸激酶自身抗体。
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产品特点

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1,样本类型:血清
2,温育条件:37±1℃下温育,室温温育
3,储存温度:2-8℃的环境下
4,读数波长:450nm

【检测原理】
定性检测抗恰加斯IgG(克氏锥虫)抗体的此试剂盒采用ELISA的原理。包被板的微孔中包被了克氏锥虫抗原,这些抗原可以结合样品中相应的抗体。洗板除去未结合的样品,再加入辣根过氧酶标记的蛋白A酶联物。加TMB后会出现蓝色反应产物,形成了可见的免疫复合物。反应液的颜色强度与样品中克氏锥虫特异性抗体的浓度成正比。之后加入硫酸终止酶反应,反应液变成黄色。450nm处读取OD值。

应用范围

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【前言简介】
克氏锥虫发生在中南美,被携带寄生虫的臭虫叮咬导致感染。疾病经历多个阶段,并且引起慢性疾病。在南非有大约400W到500W人正在经受这种疾病的折磨。10%的患者最后会导致致命的伤害,尤其是婴儿及新生儿。
叮咬并不直接传染,而是臭虫粪便通过皮肤损伤传染寄生虫。新生儿可能在子宫内被感染。血液也可能会传播。
1-2%的受感染人群会在1-4周的潜伏期后表现出症状。15岁以下儿童是主要的被影响人群。引起急性发热,腹泻,胃绞痛,肠绞痛,淋巴肿大及全身肿胀。多数情况下疾病是可以痊愈的。
潜伏期通常没有症状,只是有偶尔的免疫力下降,这一症状可以持续数年时间。
10-20%的感染人群处是在慢性疾病期,不同的内部器官,肠道以及神经系统受到影响。
死亡通常由于急性心脏猝死和慢性心脏衰竭。
 
【试剂盒组成成分】
1) 包被孔:            12*8可拆。
2) 样品稀释液:     1瓶。
3) 终止液:            1瓶。
4) 洗涤液:            20倍浓缩,1瓶。
5) 克氏锥虫蛋白A酶联物:1瓶。
6) 底物液:           1瓶。
7) 阳性质控:        1瓶。
8) 临界质控:        1瓶。
9) 阴性质控:        1瓶。
 
【样品要求】
实验中将用到血清或血浆(柠檬酸),如果样品在采集后5天内检测,可将样品储存于2-8℃的环境下,如果要储存更长时间的话,则样品必须储存于-20到-70℃。如果样品冻存了,则使用前必须将样品先融解,避免反复冻融。
 
样品稀释:
实验开始前,将所有的样品用样品稀释液按1:100的比例稀释。将10ul样品和1ml IgG样品稀释液加入相应的试管中,旋涡混匀。阳性质控和阴性质控都是即用型型的,不必稀释。
 
【检测方法】
实验开始之前仔细阅读操作步骤,严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行,为了避免洗板的影响,建议在洗板步骤时,洗板3次改成洗板5次,洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前,应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品,取适当数量的板条置于板架上。
请至少做以下几个孔: 
1孔(例A1)   做空白孔
1孔(例B1)   做阴性质控
2孔(例C1+D1)做临界质控
1孔(例E1)   做阳性质控

如果有必要的话,我们建议您质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作,并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37±1℃
1)将质控品和稀释好的样品分别100µl加入到相应的微孔中,留下A1做空白孔。
2)盖板。
3)37±1℃下温育1h±5min。
4)温育后,移去粘性金属板,弃取孔内反应液,用300µl洗涤液洗板3次。避免反应孔中的液体溅出。每次洗板间的浸润时间都应大于5秒。最后在吸水纸上拍干。
注意:洗板步骤很重要,洗板不充分将可能导致结果不精确或错误的OD值。
5)除空白孔外,在每一微孔中都加入100µl克氏锥虫蛋白A酶标物。
6)室温下温育30min,避免太阳直射。
7)重复步骤4。
8)在每一微孔中加入100µl TMB底物液。
9)室温下避光温育15min。
10)按加TMB底物液的顺序和速度在每一微孔中加入100µl终止液。
温育之后,包被板内试剂的颜色由蓝色变为黄色。
11)加终止液后30min之内在450/620nm处读取OD值。
 
【结果计算】
实验有效标准
为了使每次检验都是有效的,必须满足以下标准:
空白对照孔A1: OD值应小于0.100              阴性质控B1:OD值应小于0.200
临界质控C1和D1:OD值应当在0.250和0.900之间   阳性对照E1:OD值应当等于或高于临界值。
结果计算
临界值是临界质控的平均OD值,例如:临界质控OD值0.49+临界质控OD值0.47=0.96/2=0.48
临界值=0.48
结果说明
如果样品的OD值比临界质控的OD高10%以上,则此样品为阳性。
如果样品的OD值位于110%的临界质控OD和90%临界质控OD之间时,则样品为可疑样品。建议2-4周后,采集新的样品并重新检测,如果样品的结果仍位于灰区内,则认为此样品为阴性。
如果样品的OD值临界质控的OD低10%以上,则此样品为阴性。

结果单位= U
  
   病人样品平均OD值×10 临界值= 25 U
  
   例如:1.216×10 0.48

临界值:  10U     
灰色区:  9-11U
阴性质控: < 9U   
阳性质控: > 11U
 
【注意事项】
1. 试剂仅供体外诊断和专业人士使用。
2. 在检测开始之前,仔细和完整的阅读说明书,确保所有的程序都清楚。
3. 如果试剂盒有破坏的请提交您的投诉单,但自您拿到试剂盒后最迟不超过一个星期。
4. 按照批号和有效期,不要混合使用不同批号的试剂,也不要使用过期的试剂。
5. 遵守实验室优化管理规则和安全指南,穿实验服,带橡皮手套,有必要时请戴护目镜。
 
仅供科研使用

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