【前言简介】
克氏锥虫于 1909 年由卡 洛斯 · 查加斯发现,故美洲锥虫病又称为查加斯病。 据估计全球目前约有 1000 万人感染美洲 锥虫病,病例多分布于墨西哥、中美洲与南美洲。该病是最为普遍的“被忽视的热带病”之一,造成了严重的疾病负担 [2-3],因此,被称为“美洲新型艾滋病”[4]。近年来,随着人口迁移和经济全球化的进程,该病已扩散至欧洲等区域,呈世界性流行趋势。
叮咬并不直接传染,而是臭虫粪便通过皮肤损伤传染寄生虫。新生儿可能在子宫内被感染。血液也可能会传播。
1-2%的受感染人群会在1-4周的潜伏期后表现出症状。15岁以下儿童是主要的被影响人群。引起急性发热,腹泻,胃绞痛,肠绞痛,淋巴肿大及全身肿胀。多数情况下疾病是可以痊愈的。
潜伏期通常没有症状,只是有偶尔的免疫力下降,这一症状可以持续数年时间。
10-20%的感染人群处是在慢性疾病期,不同的内部器官,肠道以及神经系统受到影响。
死亡通常由于急性心脏猝死和慢性心脏衰竭。
【试剂盒组成成分】
1) 包被孔: 12*8可拆。
2) 样品稀释液: 1瓶。
3) 终止液: 1瓶。
4) 洗涤液: 20倍浓缩,1瓶。
5) 克氏锥虫蛋白A酶联物:1瓶。
6) 底物液: 1瓶。
7) 阳性质控: 1瓶。
8) 临界质控: 1瓶。
9) 阴性质控: 1瓶。
【样品要求】
实验中将用到血清或血浆(柠檬酸),如果样品在采集后5天内检测,可将样品储存于2-8℃的环境下,如果要储存更长时间的话,则样品必须储存于-20到-70℃。如果样品冻存了,则使用前必须将样品先融解,避免反复冻融。
样品稀释:
实验开始前,将所有的样品用样品稀释液按1:100的比例稀释。将10ul样品和1ml IgG样品稀释液加入相应的试管中,旋涡混匀。阳性质控和阴性质控都是即用型型的,不必稀释。
【检测方法】
实验开始之前仔细阅读操作步骤,严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行,为了避免洗板的影响,建议在洗板步骤时,洗板3次改成洗板5次,洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前,应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品,取适当数量的板条置于板架上。
请至少做以下几个孔:
1孔(例A1) 做空白孔
1孔(例B1) 做阴性质控
2孔(例C1+D1)做临界质控
1孔(例E1) 做阳性质控
如果有必要的话,我们建议您质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作,并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37±1℃
1)将质控品和稀释好的样品分别100µl加入到相应的微孔中,留下A1做空白孔。
2)盖板。
3)37±1℃下温育1h±5min。
4)温育后,移去粘性金属板,弃取孔内反应液,用300µl洗涤液洗板3次。避免反应孔中的液体溅出。每次洗板间的浸润时间都应大于5秒。最后在吸水纸上拍干。
注意:洗板步骤很重要,洗板不充分将可能导致结果不精确或错误的OD值。
5)除空白孔外,在每一微孔中都加入100µl克氏锥虫蛋白A酶标物。
6)室温下温育30min,避免太阳直射。
7)重复步骤4。
8)在每一微孔中加入100µl TMB底物液。
9)室温下避光温育15min。
10)按加TMB底物液的顺序和速度在每一微孔中加入100µl终止液。
温育之后,包被板内试剂的颜色由蓝色变为黄色。
11)加终止液后30min之内在450/620nm处读取OD值。
【结果计算】
实验有效标准
为了使每次检验都是有效的,必须满足以下标准:
空白对照孔A1: OD值应小于0.100 阴性质控B1:OD值应小于0.200
临界质控C1和D1:OD值应当在0.250和0.900之间 阳性对照E1:OD值应当等于或高于临界值。
结果计算
临界值是临界质控的平均OD值,例如:临界质控OD值0.49+临界质控OD值0.47=0.96/2=0.48
临界值=0.48
结果说明
如果样品的OD值比临界质控的OD高10%以上,则此样品为阳性。
如果样品的OD值位于110%的临界质控OD和90%临界质控OD之间时,则样品为可疑样品。建议2-4周后,采集新的样品并重新检测,如果样品的结果仍位于灰区内,则认为此样品为阴性。
如果样品的OD值临界质控的OD低10%以上,则此样品为阴性。
结果单位= U
病人样品平均OD值×10 临界值= 25 U
例如:1.216×10 0.48
临界值: 10U
灰色区: 9-11U
阴性质控: < 9U
阳性质控: > 11U
【注意事项】
1. 试剂仅供体外诊断和专业人士使用。
2. 在检测开始之前,仔细和完整的阅读说明书,确保所有的程序都清楚。
3. 如果试剂盒有破坏的请提交您的投诉单,但自您拿到试剂盒后最迟不超过一个星期。
4. 按照批号和有效期,不要混合使用不同批号的试剂,也不要使用过期的试剂。
5. 遵守实验室优化管理规则和安全指南,穿实验服,带橡皮手套,有必要时请戴护目镜。
仅供科研使用