【背景简介】
犬弓蛔虫（一种蛔虫）是一种常见于狗肠中的寄生线虫（线虫）。
人类是寄生虫宿主，通过在受污染的土壤中摄入感染性卵而被感染。摄取后，卵产生的幼虫会穿透肠壁，并通过循环系统带到各种各样的组织（肝脏，心脏，肺，大脑，肌肉，眼睛）。尽管幼虫在这些部位没有任何进一步的发育，但它们会引起几种局部反应，这是弓蛔虫病的基础。
在大多数情况下，弓形虫感染并不严重，许多人，尤其是成年感染了少量幼虫（未成熟蠕虫）的成年人可能没有任何症状。最严重的情况很少见，但更可能发生在经常玩泥土或吃被狗粪污染的泥土的幼儿中。弓形虫病的两个主要临床表现是眼球幼虫偏头痛（OLM），这是一种可导致失明的眼部疾病（每年有700多名感染了弓形虫的人永久丧失部分视力），以及内脏幼虫偏头痛（VLM）是一种疾病导致辅助身体器官或中枢神经系统肿胀。
【试剂盒组成成分】
1） 包被板： 12*8可拆包被板，包被了犬弓蛔虫抗原。
2） IgG样品稀释液： 1瓶，可用于样品稀释
3） 终止液： 1瓶，硫酸，即用。
4） 洗涤液： 1瓶，20倍浓缩的缓冲液。
5） 犬弓蛔虫蛋白A酶联物：1瓶，过氧化酶蛋白A，即用。
6） 底物液： 1瓶，TMB溶液，即用。
7） 阳性质控： 1瓶，即用。
8） 临界质控： 1瓶，即用。
9） 阴性质控： 1瓶，即用。
【检测方法】
试剂准备
实验前，所有试剂，样本，质控应平衡至室温。
洗涤浓缩液，20倍稀释，稀释的缓冲液可在室温下保存5天。
检测步骤
实验开始之前仔细阅读操作步骤，严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行，为了避免洗板的影响，建议在洗板步骤时，洗板3次改成洗板5次，洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前，应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品。取适当数量的板条置于板架上。
如果有必要的话，我们建议您质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作，并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37℃。
1）将质控品和稀释好的样品分别100µl加入到相应的微孔中，留下A1做空白对照孔。
2）盖板。
3）37±1℃下温育。
4）温育后，移去封板纸，弃取孔内反应液，用300µl洗涤液洗板3次。避免反应孔中的液体溅出。每次洗板间的浸润时间都应大于5秒。最后在吸水纸上拍干。
注意：洗板步骤很重要，洗板不充分将可能导致结果不精确或错误的OD值。
5）除空白孔外，在每一微孔中都加入犬弓蛔虫蛋白A酶标物。
6）室温下温育，避免太阳直射。
7）重复步骤4。
8）在微孔中加入 TMB底物液。
9）室温下避光温育。
10）按加TMB底物液的顺序和速度在每一微孔中加入终止液。
温育之后，包被板内试剂的颜色由蓝色变为黄色。
注意：高阳性的病人样品会引起染色剂沉淀。这些沉淀物会影响OD值的读取。例如：我们建议按1：1的比例用生理盐水预先稀释样品。然后按1：100的比例用稀释液稀释样品，并将结果乘以2。
11）加终止液后30min之内读取OD值。
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