【前言简介】
莱姆病是一种蜱传螺旋体感染性疾病。莱姆病的病原体为莱姆病螺旋体，能引起人类慢性游走性红斑，以及心脏、神经和关节等多系统受累的疾病，对人群健康危害较严重。莱姆病的实验室诊断方法主要是血清学方法。本试剂盒采用特异性莱姆氏螺旋菌三个亚型的混合抗原进行微孔板包被,具有较高的检测灵敏度和特异性。
【检测原理】
采用间接ELISA方法，将莱姆氏螺旋菌抗原包被于微孔板底部，检测时，稀释的血清或脑脊液样本及试剂盒质控品加入微孔板，样本中的抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体与抗原结合，经过孵育，洗涤，加入HRP标记的抗人IgG二抗，在经过孵育，洗涤后加入HRP酶的底物显色剂TMB，终止显色，酶标仪读板，根据Cutoff值判断样本的阴阳性。
【储存条件】
试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封后的板条密封于2-8℃的环境下有效期为3个月。
【试剂盒组成成分】
1×12×8
MTP
包被板，可拆，微孔中包被了抗人IgM的抗体。
1×15mL
ENZCONJ
酶联结合物，绿色，即用性，HRP标记的抗人IgG抗体
4×1.5mL
CONTROL A-D
A-D标准品: 含量为: 2; 10; 50; 200 U/mL，其中标准品B作为Cutoff标准品,内含人抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体，稳定剂
1.5mL
CONTROL+
阳性质控，即用，内含人抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体，稳定剂
1.5mL
CONTROL-
阴性质控，即用，内含人血清和稳定剂。
1×100mL
DILBUF
稀释用缓冲液，蓝色，内含磷酸缓冲液、去垢剂、BSA和稳定剂
1×100mL
WASHBUF
洗涤液（10×），内含磷酸缓冲液、去垢剂和稳定剂。
1×15mL
TMB SUBS
TMB底物液，即用，内含TMB。
1×15mL
TMB STOP
TMB终止液，即用，含1M H2SO4
检测步骤
1) 将标准品、质控品、稀释样本分别100μL加入包被板的微孔中。定性检测只需加入标准品B。
2) 盖板，37℃下温育60min。
3) 弃取微孔内反应液，每孔用300ul的已稀释好的洗涤液洗3次，在吸水纸上将板拍干。
4) 在每一微孔中加入100μL的二抗酶结合物。
5) 盖板（新的粘性金属板），37℃下温育30分钟。
6) 弃取微孔内反应液，每孔用300μL的已稀释好的洗涤液洗3次，在吸水纸上将板拍干。
7) 如果可以的话，使用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同，使用自动置换型移液器并避免气泡产生。
8) 每孔加100μL TMB底物液
9) 18-25℃下避光温育30min（无须盖板）
10) 每孔加100ulTMB终止液以终止底物反应。此时，微孔内溶液由蓝色变成黄色
11) 加终止液后，60分钟内在450nm处测OD值（参比波长：600-650nm）
定性判断：
标准品B的OD值可以作为判断阴阳性结果的Cutoff值，样本OD之在Cutoff值上下10%范围内，则结果位于灰区内，判为可疑。如果高于Cutoff值则判为阳性，低于Cutoff值则判为阴性。
定量判断：
在半对数坐标纸上或用自动生成的方法，以标准品的OD值为Y轴，浓度为X轴，绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图，用标准品的每一单值进行计算（样品结果明显异常的值必须删除掉，应使用更加合理的单值）。样品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了，就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于最高标准，则应根据实验前的准备说明所述对样品进行稀释，并重新检测。
