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出血热病毒检测试剂盒
出血热检测试剂盒
通用名称:出血热病毒IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Hanta Virus IgM ELISA

【预期用途】
此试剂盒用于定性测定人血清或血浆(柠檬酸盐或肝素)中针对汉坦病毒的IgM抗体,仅用于科研。
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产品特点

出血热病毒检测试剂盒
【检测原理】
微孔板包被有重组汉坦病毒抗原以结合样品的相应抗体。洗涤孔以除去所有未结合的样品材料后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgM酶联物。该酶联物被汉坦病毒特异性抗体捕获并结合。通过加入四甲基联苯胺(TMB)底物使得结合的酶联物形成的免疫复合物可视化,得到蓝色反应产物。该产物的强度与样本中汉坦病毒特异性抗体的量成比例。加入硫酸以终止反应。这会产生黄色滴定终点颜色。使用酶标仪读取450nm处的吸光度。

应用范围

出血热病毒检测试剂盒
【背景介绍】
汉坦病毒是布尼亚病毒科中的阴性RNA病毒。 人类可能通过尿液,唾液或接触啮齿动物废物感染汉坦病毒。 一些汉坦病毒引起人类可能致命的疾病,如肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS),但其他一些并未与人类疾病有关。
汉坦病毒的人类感染几乎完全与人类与啮齿动物排泄物的接触有关,但最近报道了南美洲的安第斯病毒的人与人之间的传播。
在感染症状出现之前,汉坦病毒在人体中的潜伏期为2至4周。
 HFRS的症状可分为五个阶段:
1.发热阶段:症状包括发烧,发冷,手掌出汗,腹泻,不适,头痛,恶心,腹部和背部疼痛,呼吸道问题,如流感病毒感染常见的问题,以及胃肠问题。这些症状通常发生三至七天,并在暴露后约两至三周出现。
2.低血压阶段:当血小板水平下降并且症状可导致心动过速和低氧血症时,就会发生这种情况。这个阶段可以持续2天。
3.少尿期:该阶段持续三至七天,其特征在于肾衰竭的发作并且发生蛋白尿。
4.利尿期:其特点是每天3至6升的利尿,可持续数天至数周。
5.康复期:这通常是在恢复发生并且症状开始改善时。特别受HFRS影响的区域包括中国,朝鲜半岛,俄罗斯(汉坦,普马拉和首尔病毒)以及北欧和西欧(普马拉和多布拉瓦病毒)。

【试剂准备】
开始测试前,所有试剂、样品、质控品需平衡至室温。
酶标板条
准备需用量的重组汉坦病毒抗原包被板,剩余的板应与在2-8℃下储存于含有干燥剂的铝箔袋中重新密封; 效期内稳定。
浓缩洗涤液(20X)
洗涤液按1+19的比例稀释,如:10ml洗涤液+190ml去离子水。稀释的洗涤液在室温(20-25℃)可稳定5天,溶液中的晶体在水浴中升温至37℃时消失。稀释前混匀。
TMB底物液
即用型,必须在2-8℃,远离光源保存。溶液应无色或有浅蓝色。如果基板变成蓝色,则可能会被污染,应弃用。
 
【样本采集与准备】
使用人血清或血浆(柠檬酸盐/肝素)样品。如果在样品收集后5天内进行测定,样品应保持在2-8℃; 否则应将其等分并储存于深冻(-20℃至-70℃)条件下。如果样品储存冷冻,在测试前样品混合均匀。避免反复冻融。不建议对样品进行热灭活。
 
样本稀释
在测定前,所有样品应用IgM样品稀释液1 + 100稀释。
如:将10ul样品和1ml IgM样品稀释液加入到管中以获得1 + 100稀释液,并涡旋充分混合。
 
【检测方法】
测试前准备
在进行测定之前,请仔细阅读测试方案。结果可靠性取决于是否严格遵守所述的测试协议。以下测试程序仅对手动程序进行了验证。如果在ELISA自动系统上进行测试,我们建议将洗涤步骤从3次升到5次,洗涤液体积从300ul增加到350ul,以避免洗涤步骤影响结果。 在开始测定之前,应在试剂盒中提供的结果表中仔细确定所有标本和对照的分布和排版。 选择所需数量的微量滴定条或孔,并将其插入支架。
按照给定的顺序执行所有测定步骤,并且在步骤之间没有任何明显的延迟。应使用干净的一次性吸头来分配每个质控和样品。将培养箱调整至37℃±1℃。
1. 分别将100ul标准/质控品和稀释样品加入到各孔中。保留A1为基底空白。
2. 使用试剂盒中提供的盖板膜盖板。
3. 在37±1℃下孵育1小时±5分钟。
4. 孵育完成后,移去铝箔盖板膜,弃去孔中的内容物,用300ul洗涤液洗涤各孔三次。避免溶液溢出反应孔。每个洗涤周期之间的浸泡时间应为大于5秒。最后,在下一步之前,在吸水纸上拍干板孔中液体。
注意:洗涤至关重要!洗涤不足导致精度差和吸光度值错误升高。
5. 将100ul酶联物加入到除空白孔(例如A1)外的所有孔中。盖板。
6. 室温(20〜25℃)孵育30分钟。避免暴露在阳光下。
7. 重复步骤4。
8. 每孔加入100ulTMB底物溶液。
9. 在黑暗中室温(20〜25℃)孵育15分钟。
10. 以与TMB底物溶液相同的顺序和相同的速率将100ul终止液加入到所有孔中。孵育过程中溶液有蓝色变黄。
11. 在加入终止液后30分钟内测量样品在450/620nm处的吸光度。
 
测定
使用A1孔中的底物空白将酶标仪调零。
如果由于技术原因,使用A1孔中的底物不能将酶标仪调整为零,则从测量的所有其他吸光度值中减去孔A1的吸光度值,以获得可靠的结果!
测量所有孔在450 nm处的吸光度并记录每个对照和患者样品在分布和排版中的吸光度值。
推荐使用620 nm作为参考波长的双波长读数。适用时计算所有复孔的平均吸光度值。
 
【结果】
质量控制
为了使测定有效,必须满足以下标准:
底物空白:吸光度值<0.100。
阴性质控:吸光度值<0.200 并<临界值。
临界质控:吸光度值0.150 - 1.300
阳性质控:吸光度值>临界值。
如果这些标准不能满足,测试是无效的,必须重新测定。
结果计算
临界值是临界质控测定的平均吸光度值。
示例:临界质控吸光度值0.44 +临界质控吸光度值0.42 = 0.86/2=0.43
临界值= 0.43
DRG单位结果
样本OD值X10 
  临界值             =DRG单位(DU)
例如:1.591 X 10 
  0.43         =37DU
结果解释
临界值:10 DU
灰区: 9-11       DU:无法清楚地检测到针对病原体的抗体。建议在2至4周内用新鲜样品重复测试。如果结果再次模棱两可,则将样品判断为阴性。
阴性:  <9  DU :样品不含抗病原体的抗体,以前接触抗原(病原体和疫苗)不太可能
阳性 : >11 DU :存在针对病原体的抗体,已经与抗原(病原体和疫苗)接触。
1. 不应在单一测试结果的基础上确定传染病的诊断。精确诊断应考虑临床病史,症状学和血清学数据。
2. 在免疫功能低下的患者和新生儿中,血清学数据仅具有限制价值。

四大优势

专业实验室

科润达生物拥有P2级实验室及GMP车间,严格按食药监械监2015-218号令医疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检查指导原则的相关要求管理。

学术态度严谨

国家注册检验师带领的实验团队,严格落实检验操作每一处细节,实验标准品定期更新,定期与外部实验室做实验数据比对等,确保实验数据的严谨。

数据客观准确

科润达生物为您配备了有着二十多年免疫专业和经验丰富的技术团队,可以为您提供客观真实的实验数据,并承诺所用的检测试剂均为优质的原装进口产品。

服务高效快捷

科润达生物以客户服务为导向,实验室管理体系与业务接口无缝对接,确保用户需求及时得到分析评价、可以为用户分析测试结果、协助用户解决技术问题。

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