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登革热检测试剂(三合一快测卡)的应用
时间:2020-03-12 点击次数:426

 

登革热检测试剂(三合一快测卡)的应用说明书

【产品名称】

通用名称:登革热NS1抗原,IgG/IgM抗体快速检测卡

英文名称:One StepDengue NS1 Antigen& IgG/IgM Antibody Duo Panel RapiCard InstaTest

 

【产品规格】                 

25T

登革热检测试剂(三合一快测卡)

【预期用途】

登革热NS1抗原,IgG/IgM抗体快速检测试剂是一种体外定性免疫色谱测定法,用于同时快速检测人血,血清和血浆标本中的登革热NS1抗原和登革热IgG / IgM抗体。登革热检测试剂盒测试结果旨在帮助诊断登革热。

 

【前言简介】

就发病率,死亡率而言,登革热是世界上最重要的蚊媒疾病之一。登革热病毒(1-4型血清型)属于黄病毒类,由白天咬人的食虫蚊子(Aceder mosquitos)在自然界传播。最重要的蚊媒是高度驯化的城市物种埃及伊蚊。登革热原发性感染(也称为登革热)是登革热疾病中最常见的类型。它与轻度至高烧,头痛,肌肉疼痛和皮疹有关。继发性感染被称为登革出血热(DHF)或登革热休克综合症,通常导致高烧,在许多情况下,还伴有出血事件和循环衰竭。登革热休克综合征患者的病死率可高达44%。登革热通常表现为突然发作的发烧,伴有头痛,后球囊疼痛,背部和四肢疼痛(骨折热),淋巴硬化症和斑丘疹。在地方病地区确诊为登革热的患者通常会继发感染,而在非地方病地区则通常被诊断为原发感染。对登革热病毒的特异性抗体反应可进行血清诊断,并区分原发性和继发性登革热感染。

 

登革热NS1抗原,IgG/IgM抗体快速检测卡

登革热NS1(非结构蛋白I)是高度保守的糖蛋白。发现NS1抗原从发烧的第一天到发烧后的第9天在受感染患者的样本中循环。抗NS1抗体在人体中升高后,可检测到的NS1抗原迅速下降。当可检测的NS1抗原下降时,可以在更长的时间内检测到抗体升高。通常,对于原发性登革热感染,在发病后3至10天以及继发感染在发病后2至3天才检测到IgM。在原发感染中,IgG在第14天出现,并且可能持续多年。继发感染会产生回忆性IgG抗体反应,其特征是在疾病发作后4-5天可检测到的IgG抗体迅速升高。

NS1抗原和抗登革热抗体的检测为诊断从早期感染到疾病发作后的登革热感染提供了工具。它可以提高登革热感染诊断的准确性。

 

登革热检测试剂(三合一快测卡)检测原理

登革热NS1抗原检测是一种夹心固相免疫色谱法。当将样品添加到样品垫中时,它会穿过结合物垫,并移动包被在结合物垫上的金抗NS1结合物。混合物通过毛细作用沿膜移动,并与涂在测试区域的抗NS1抗体反应。如果存在NS1,则结果是在测试线区域中形成了一条彩色带。如果样品中没有NS1,则该区域将保持无色。样品继续移至质控区域,并形成粉红色至紫色,表示测试正在进行并且结果有效。

 

登革热IgG/IgM抗体测试利用了免疫层析原理。小鼠抗人IgM和人IgG抗体分别固定在硝酸纤维素膜上,作为两条单独的测试线(IgM线和IgG线)固定在测试设备的测试窗口中。测试窗口中的IgG线更靠近样品孔,然后是IgM线。当测试样品流经膜时,如果样品中存在登革热病毒的特异性抗体(IgM和/或IgG),则与着色的重组抗原-胶体金结合物形成复合物。该复合物在膜上进一步移动到测试区域,在该区域被包被在膜上的抗人IgM和/或人IgG抗体捕获,导致形成彩色条带,这表明测试结果呈阳性。在测试窗口中如果没有此彩色条带,则表示测试结果为阴性。当测试正确执行时,无论标本中是否存在抗登革热病毒抗体,内置的质控线将始终显色。

 

登革热检测试剂(三合一快测卡)组成成分

  1. 登革热同测卡

NS1-------在膜的测试区上具有NS1特异性抗体的试纸和有色的抗NS1抗体-金结合物垫。

IgG/IgM---在膜的测试区上具有抗h IgG和抗h IgM的试纸和有色登革热抗原-金结合物垫。

  1. 使用说明
  2. 一次性移液管
  3. 5µL毛细管吸管
  4. 样品缓冲液

 

所需材料(未提供)

  1. 标本收集容器
  2. 计时器

 

【储存和稳定性】

如试剂盒上所示,试剂盒中的密封小袋可在20-30℃的温度范围内保存。

 

登革热检测试剂(三合一快测卡)

【样本要求】

  1. 应在标准实验室条件下采集血清,全血或血浆标本。
  2. 在通过批准的技术收集样品之前,无需事先对患者进行特殊准备。
  3. 该测试对新鲜的全血/血清/血浆样品效果最佳。如果无法立即进行测试,则在延迟测试的情况下,血清/血浆可在2-8℃下最多保存3天。为了长期保存,血清/血浆标本可以在-20℃冷冻3个月,或在-70℃冷冻更长的时间。应避免样品反复冷冻和解冻。叠氮化钠最多可添加0.1%作为防腐剂,而不会影响测试结果。
  4. 应避免使样品热失活,这可能导致溶血和蛋白质变性。避免使用已溶血,凝结,污染,脂族和粘稠/浑浊的标本。
  5. 含有沉淀物或颗粒物的样品必须进行离心分离,澄清的上清液仅用于测试。
  6. 不要通过加热使样品失活。
  7. 标本的运输应符合当地病原体运输规定。

 

登革热检测试剂(三合一快测卡)【检测步骤】

1.在测试之前,将试剂盒置于室温。

 

2.打开包装袋并取出卡。打开后,必须立即使用测试卡。

3.在测试卡上标记患者的身份。

4.a 使用设备随附的移液吸管,通过按下移液管的球体来转移样品。

 

4.b 使用提供的毛细管吸量管取出5 µL样品。移液器开口端附近的黑条表示隔间中需要的5 µl样品。

 

  1. b 将样品放在“S1▼”指向的角落。

 

5.a 将移液器垂直放置在设备左侧的“S”样品孔上方,并将3滴(120-150 µL)样品滴入孔中。

 

5.b 将2滴(80-100 µL)样品缓冲液分配到右侧的“S”样品孔中。

 

6.在20分钟结束时读取结果。较强的阳性样本可能会更早显示结果。

注意:20分钟后的结果可能不准确。

 

 

【结果】

  阳性

 

质控线可见

NS1 阳性

NS1 阳性

NS1 阴性

NS1 阴性

NS1 阴性

IgM 阳性

IgM 阴性

IgM 阳性

IgM 阴性

IgM 阳性

IgG 阳性

IgG 阴性

IgG 阳性

IgG 阳性

IgG 阴性

 

阴性无效

 

测试区无线显色,质控区显色

质控区无线显色

 

登革热NS1抗原,IgG/IgM抗体快速检测卡

【质量质控】

  1. 控制带是一种内部试剂和程序控制。
  2. 如果测试正确执行并且试剂具有反应性,则会出现。
  3. 良好实验室规范建议每天使用质控材料以验证设备的可靠性。该试剂盒未提供的质控材料可能在市场上有售。

 

【局限性】

  1. 该测试用于定性检测血液,血清或血浆样品中的登革热NS1抗原和/或抗登革热抗体,剂量未表明分析物的量。
  2. 该测试仅用于体外诊断。
  3. 测试结果阴性不能排除最近的感染。
  4. 登革热病毒,日本脑炎,tick传性脑炎,黄热病病毒和西尼罗河病毒等病毒属于恶性病毒属,在抗体检测中具有血清学交叉反应。
  5. 与所有诊断测试一样,确定的临床诊断不应基于单个测试的结果,而应在评估所有临床发现后进行。

 

【期望值

登革热NS1抗原可在发烧后的第1天到第9天在人血中循环。但是,抗原水平随抗体水平的升高而迅速下降。

在原发感染中,抗登革热IgM在疾病发作后3-5天可检测到。 疾病发作后14天可检测到抗登革热IgG,并且可能持续多年。

在继发感染中,抗IgG抗体在疾病发作后的1-2天升高,并且通常伴随着抗登革热IgM抗体的升高。

 

【产品性能】

登革热NS1抗原,IgG/IgM抗体快速检测卡准确性

  1. 在51份可疑的早期登革热感染的样本中,测试结果总结如下。

样本数量

NS1

IgM

IgG

百分比

17

阳性

阴性

阴性

33.3%

14

阳性

阳性

阴性

25.9%

5

阳性

阴性

阳性

9.8%

4

阳性

阳性

阳性

7.8%

1

阴性

阳性

阴性

2.0%

4

阴性

阴性

阳性

7.8%

1

阴性

阳性

阳性

2.0%

5

阴性

阴性

阴性

9.8%

在抗体无法检测之前,有33.3%的样品显示NS1阳性。证明当抗体未升高到可检测水平时,NS1检测可帮助在感染的窗口期检测登革热感染。仅使用NS1,阳性率为78.4%。通过抗体测试,总阳性率提高到90.2%。证明登革热NS1和抗体测试的结合可以增强早期登革热感染的敏感性。

 

登革热NS1抗原,IgG/IgM抗体快速检测卡特异性

  1. 测试了来自健康献血者的总共79个样品。测试结果总结如下。

样本类型

样本数量

阴性

阳性

特异性

血清

31

31

0

100%

血浆

28

28

0

100%

全血

20

20

0

100%

与测试的健康献血者样品的特异性为100%。

 

【干扰】

以下列出的提到浓度的化合物不会影响测试结果。

对乙酰氨基酚136 µg/mL免疫球蛋白A 2.20 mg/mL

白蛋白47mg/mL免疫球蛋白G 10.00 mg/mL

胆红素7.40 mg/mL免疫球蛋白M1.10 mg/mL

胆固醇260 mg/mL总蛋白70.40 mg/mL

肌酐6.90 mg/mL甘油三酸酯1.90 mg/mL

地高辛3.00 ng/mL葡萄糖3.90 mg/mL

乙醇2.10 mg/mL尿酸92 µg/mL

尿素氮700 µg/mL

 

登革热检测试剂(三合一快测卡)注意事项】

  1. 此试剂盒仅用于体外诊断。
  2. 此试剂盒仅供专业使用。
  3. 在执行测试之前,请仔细阅读说明。
  4. 本产品不包含任何人源材料。
  5. 到期后请勿使用试剂盒内容物。
  6. 处理所有标本是否具有潜在传染性。
  7. 遵循标准的实验室程序和生物安全准则来处理和处置潜在感染性材料。完成测定步骤后,将样品在121℃高压灭菌至少20分钟后处置。或者,可以在处置前用0.5%的次氯酸钠处理它们1-2小时。
  8. 进行测定时,请勿用口吸移试剂,也请勿吸烟或进食。
  9. 在整个过程中都要戴手套。

 

【生产企业】

企业名称:Diagnostic Automation/Cortez Diagnostics, Inc.

 

【国内售后单位】

深圳市科润达生物工程有限公司

 

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