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如何检测培养液中IFN-γ
时间:2020-01-13 点击次数:13

如何检测培养液中IFN-γ

 

本文介绍的是采用ELISA方法检测大鼠培养液中的IFN-γ,即是干扰素-γ。下面是具体的检测步骤,科润达生物提供大鼠IFN-γ试剂盒以及人IFN-γ试剂盒。有需要可咨询我们获取资料。

 

用ELISA法测试细胞培养上清液。其他生物样品可能适用于测定。凝结后应尽快从凝块中清除血清。
注意:由于样品浓度高而可能产生的“钩状效应”。
在测定中使用之前,必须澄清含有可见沉淀的样品。样品应等分,并必须在-20℃冷冻保存,以避免失去生物活性的大鼠IFNγ。如果样品要在24小时内运行,则可以将其保存在2至8℃下。避免重复冻融循环。测定前,应将冷冻样品缓慢地升至室温并轻轻混合。
 

IFN-γ检测步骤
1.确定所需的微孔板数量。
2.用洗涤缓冲液洗涤微孔板两次。
3.在微孔板上进行标准稀释:一式两份向所有标准孔中添加100 µl样品稀释液。移取100 µl准备好的标准液至第一个孔中,并通过将100 µl从一个孔转移至另一个孔来创建标准稀释液。从最后的孔中弃去100 µl。
或者在管中进行外标稀释:在微孔板中吸取100 µl这些标准稀释液。
4.向空白孔中一式两份添加100 µl样品稀释液。
5.将50 µl样品稀释液添加到样品孔中。
6.向指定的样品孔中一式两份加入50 µl样品。
7.准备生物素结合物。
8.在所有孔中加入50 µl生物素结合物。
9.盖上微孔板并在室温(18至25℃)下孵育2小时。
10.准备抗生蛋白链菌素-HRP。
11.清空并用洗涤缓冲液将微孔板洗涤3次。
12.在所有孔中加入100 µl稀释的链霉亲和素-HRP。
13.盖上微孔板,在室温(18至25℃)下孵育1小时。
14.清空并用洗涤缓冲液将微孔板洗涤3次。
15.向所有孔中添加100 µl TMB底物溶液。
16.将微孔板在室温(18至25℃)下孵育约10分钟。
17.向所有孔中添加100 µl终止液。
18.用酶标仪在450 nm下测量颜色强度。

 

想了解更多关于IFN-γ的产品资料,可咨询我们获取。科润达竭诚为您服务。

 

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