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(酶联免疫法)ELISA实验结果显色淡灵敏度偏低——原因及解决方法
时间:2019-08-13 点击次数:175

ELISA实验结果显色淡灵敏度偏低

 

原因1:试剂盒未充分平衡

解决办法:试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。

原因2:酶标仪滤光片设置有问题或者波长选择不对

解决办法:确认仪器设置及选择正确的波长检测。

原因3:酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥

解决办法:防止板过于干燥。

原因4:包被抗体遭到破坏

解决办法:操作温和,移液枪不能碰到孔底。

原因5: 样本浓度过高或存在基质效应

解决办法:建议做不同稀释倍数,确认样本最佳稀释倍数。

原因6:样本和抗体孵育条件不合适

解决办法:按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。

原因7:样品不适合做ELISA检测   

解决办法:样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)。

原因8:洗涤浸泡时间过长

解决办法:按照说明书操作,勿人为增加浸泡时间。

原因9:错误的误稀释偶联HRP试剂

解决办法:弃去试剂,重新配置。

原因10:TMB底物孵育时间过短,因非人为因素影响,需要优化孵育时间

解决办法:确定合适的孵育时间人为判定-最高浓度S1出现深蓝色,S4-5有淡蓝色。或机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65。

原因11:偶联HRP试剂污染

解决办法:弃去试剂,重新配置。

原因12: 酶标板不适合做ELISA

解决办法:不能使用细胞培养板,建议使用ELISA专用高吸附力板子。

 

科 润 达 生 物 提供解答:总结为避免显色淡灵敏度低,需注意以下几点:

1、 常规ELISA试剂盒平衡至30min;

2、 检测抗体、偶联HRP请按说明书稀释比;

3、 样本、抗体孵育条件(温度、转速),请根据说明书;

4、 控制TMB底物显色时间。

 

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